胸腺肽β4基因的克隆、表达及活性检测

编号 zgly0000556542

文献类型 期刊论文

文献题名 胸腺肽β4基因的克隆、表达及活性检测

作者 赵晓民  张晓光  童德文  吴淑华 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 

母体文献 西北农林科技大学学报 

年卷期 2008,36(9)

页码 17-21

年份 2008 

分类号 Q78 

关键词 人胸腺肽β4  基因表达  MTT  活性检测 

文摘内容 【目的】在大肠杆菌中克隆和表达胸腺肽β4(thymosin β4，Tβ4)基因，并进行分离纯化及免疫活性测定。【方法】将基因序列拆分成10个互补的小片段，互为模板，采用PCR两步法扩增得到Tβ4基因。将Tβ4基因片段克隆至pTXB1载体的Nde I和Xho I酶切位点之间，将重组质粒转化至E．coli BL21 codon plus，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达、几丁质(Chitin beads)亲和层析柱纯化Tβ4。然后用MTT法测定Tβ4的免疫活性。【结果】经测序表明获得了序列正确的人胸腺肽β4基因，构建重组质粒pTXB1-Tβ4，经SDS-PAGE电泳分析表明，重组质粒pTXB1-Tβ4在E．coli BL21 codon plus中高效表达，表达量为30％。将表达产物用几丁质亲和层析柱纯化，获得较纯的Tβ4。MTT检测表明，Tβ4有促进淋巴细胞增殖的活性，最适刺激质量浓度为1．6μg／mL。【结论】获得高效表达的、高纯度的、有生物活性的重组Tβ4，它可促进淋巴细胞的分化、增殖，具有免疫活性，最适刺激质量浓度为1．6μg／mL。