小鼠单抗R5基因的克隆和基于CDR相似性的人源化质粒构建

编号 zgly0000520832

文献类型 期刊论文

文献题名 小鼠单抗R5基因的克隆和基于CDR相似性的人源化质粒构建

作者 余君铭  耿建国 

作者单位 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院研究生院 

母体文献 浙江大学学报：理学版 

年卷期 2007,34(5)

页码 570-575

年份 2007 

分类号 Q952.5 

关键词 R5  抗体基因克隆  人源化  CDR-grafting  表达载体构建  活性检测 

文摘内容 抽提小鼠R5杂交瘤细胞的mRNA，逆转录成cDNA，扩增出R5单抗的轻重链基因．分析克隆到的轻重链基因的序列信息，得到互补决定区(cDR)序列信息．构建真核表达质粒并在真核细胞中表达．采用互补决定区移植(CDR-grafting)的方法人源化鼠源单抗R5基因．先从人种系(germline)抗体基因片段中选出和克隆到的小鼠R5抗体基因具有相同互补决定区正则结构类型(CDR canonical structure class)的片段，合成寡核苷酸并采用PCR重叠延伸(overlap extension)的方法得到人源化的VL和VH，并采用双酶切方法分别克隆入昆虫杆状病毒表达载体pAc-k-CH3中，经测序确定序列正确．大抽后的质粒和线性杆状病毒DNA共转Sf9昆虫细胞，表达得到的抗体用ELISA能检测到和抗原的结合活性．轻重链基因的成功克隆和人源化表达质粒的构建及表达为下一步改善人源化R5单抗的特性打下了基础�