BPIV-3和BVDV双重RT-PCR快速检测方法的建立

编号 zgly0001400576

文献类型 期刊论文

文献题名 BPIV-3和BVDV双重RT-PCR快速检测方法的建立

作者 刘晓乐  张敏敏  陈颖钰  胡长敏  陈焕春  郭爱珍 

作者单位 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室  华中农业大学动物医学院  华中农业大学动物科技学院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2011年11期

年份 2011 

分类号 S855.3 

关键词 双重PCR  检测方法  牛副流感病毒3型  牛病毒性腹泻病毒 

文摘内容 参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因序列,分别针对BPIV3特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法。最佳扩增条件为94℃30s,56.2℃30s,72℃1min,循环30次;72℃延伸5min,16℃10min;BVDV引物浓度为1.0μmol/L,BPIV-3引物浓度为0.5μmol/L。采用该方法检测BPIV-3和BVDV参考病毒株,能同时扩增出预期为425bp和294bp大小的特异性片段,而扩增牛传染性鼻气管炎病毒、牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、致病性大肠埃希菌、多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和鼠伤寒沙门菌等均呈阴性反应。对参考病毒株进行梯度稀释检测,结果证明该方法检测BPIV-3的灵敏度可达10-3 TCID50/0.1mL,而BVDV的灵敏度达102 TCID50/0.1mL。