胡萝卜抗冻蛋白的快速大量突变及原核表达

编号 zgly0000480207

文献类型 期刊论文

文献题名 胡萝卜抗冻蛋白的快速大量突变及原核表达

作者 张党权  谭晓风  仲健  王金发 

作者单位 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室  中山大学生命科学学院基因工程教育部重点实验室  细胞产品国家工程研究中心 

母体文献 中南林学院学报 

年卷期 2006,26(5)

页码 15-19

年份 2006 

分类号 S631.2  Q511 

关键词 生物技术  胡萝卜  抗冻蛋白  定点突变  交错延伸PCR  原核表达 

文摘内容 胡萝卜抗冻(DcAFP)具有典型的LRR特征, 由约24个氨基酸残基组成重复单元。其中的保守基序是: P×××××L××L××L×LS×N×L×G×I, 其中的保守天冬酰胺在与冰晶表面结合中起着关键的作用。为了探明该关键氨基酸对DeAFP重要性, 需要对其进行一系列突变, 以检测这些突变体的热滞可能发生的变化, 而这需要构建大量的突变体。基于此, 采用定点突变技术对该基序中保守的天冬酰胺进行了一系列的疏水性缬氨酸突变和亲水性的谷氨酰胺突变, 并将这一系列突变体克隆至原核表达载体pET—11a中, 在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了高效表达与初步纯化, 为后续测定其热滞活性的变化和验证天冬酰胺的重要性打下了基础。