杠柳ISSR引物的筛选及PCR反应体系的优化

编号 zgly0001534075

文献类型 期刊论文

文献题名 杠柳ISSR引物的筛选及PCR反应体系的优化

作者 狄魁颖  白志军  杨书祥  贾艳晶  米爽  黄大庄 

作者单位 河北农业大学园林与旅游学院  河北省高速公路邢衡筹建处  河北省高速公路邢衡管理处 

母体文献 河北林果研究 

年卷期 2016年02期

年份 2016 

分类号 S567.19 

关键词 杠柳  ISSR  PCR  体系优化 

文摘内容 为建立适用于杠柳ISSR分子标记研究的扩增体系,进一步利用ISSR标记研究杠柳遗传多样性,探讨了杠柳ISSR分子标记中的各影响因素,分别对河北11个不同地区杠柳基因组DNA进行PCR扩增,在Taq MasterMix（康为世纪）基础上对影响ISSR-PCR扩增结果的模板DNA浓度、循环次数、引物退火温度进行梯度筛选。结果表明:在100条通用引物中共筛选出34条扩增条带清晰、整齐的ISSR引物;确立了适合杠柳ISSR分子标记的反应体系:总反应体积25μL,其中Taq MasterMix（含DNA聚合酶、MgCl2、dNTPs、反应缓冲液以及稳定剂）12.5μL,模板DNA 1μL（70ng/μL）,正向引物和反向引物各1μL（10μmol/L）。该体系的确立为今后利用ISSR技术对杠柳种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础。