两种植原体的PCR检测及其体系优化

编号 zgly0000609374

文献类型 期刊论文

文献题名 两种植原体的PCR检测及其体系优化

学科分类 220.3020;森林昆虫学

作者 马春春  张祥林  乾义柯  王翀 

作者单位 新疆出入境检验检疫局  新疆农业大学农学院 

母体文献 新疆农业科学 

年卷期 2009,46(3)

页码 561-566

年份 2009 

分类号 S41 

关键词 植原体  PCR  巢式PCR  体系优化 

文摘内容 用已报道的植原体通用引物对葡萄黄化病和枣疯病植原体进行常规PCR及巢式PER检测，并对PCR反应体系进行优化。结果表明：常规PCR扩增出了1．5kb的特异片段，所需PCR模板DNA用量为20ng／μL；在PCR基础上的巢式PCR扩增出1．2kb的特异片段，所需PCR模板DNA用量为2pg／μL。检测灵敏度提高约10000倍。优化试验表明：25μL应体系中，MgCl2用量对扩增效果影响最大。最终最佳反应体系确立为：25mM MgCl2 1．7μL。2．5mM dNTP 1．8μL，5U／μL Taq酶可选用0．2μL，10mM引物对各0．2μL,最佳退火温度为45．0℃。