锦带花ISSR-PCR反应体系的建立与优化

编号 zgly0000731513

文献类型 期刊论文

文献题名 锦带花ISSR-PCR反应体系的建立与优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 刘洁  王志刚  聂庆娟  阎爱华 

作者单位 河北农业大学林学院 

母体文献 北方园艺 

年卷期 2011(20)

页码 124-127

年份 2011 

分类号 S685.99 

关键词 锦带花  ISSR-PCR  建立  优化 

文摘内容 以锦带花幼叶为试材, 提取锦带花基因组的DNA, 并对其纯度、浓度进行检测, 建立适合锦带花的ISSR-RCR反应体系。结果表明: DNA扩增效果良好, 完全能满足进一步试验的需要。同时对锦带花ISSR-PCR反应体系中各个影响因素进行优化, 建立了适合锦带花ISSR分子标记的最佳反应体系, 即在20μL的反应体系中, 含稀释浓度为3倍的DNA模板, 0.20mmol/LdNTP, 稀释10倍体积高保真PCR缓冲液含(Mg2+)3.0uL; 1.00umol/L引物, 1.25UTaq酶。扩增程序为: 94℃预变性5min; 94℃变性30s, 52.0℃退火45s, 72℃延伸1.50min, 45个循环; 最后72℃延伸5min, 4℃保存。应用该ISSR体系对3份锦带花种质进行了扩增, 证实了该体系的适用性和稳定性。