鹅掌楸ISSR-PCR反应体系的建立及优化

编号 zgly0000717843

文献类型 期刊论文

文献题名 鹅掌楸ISSR-PCR反应体系的建立及优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 占志勇  徐刚标 

作者单位 中南林业科技大学林木遗传育种实验室 

母体文献 中南林业科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2010,30(6)

页码 80-84

年份 2010 

分类号 S792.21 S722.33 

关键词 分子生物学  鹅掌楸  叶片基因组DNA  ISSR-PCR  优化 

文摘内容 为建立鹅掌楸简单序列重复区间扩增ISSR的PCR优化反应体系,以鹅掌楸叶片基因组DNA为材料,系统地测试了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量及退火温度对ISSR-PCR反应体系的影响。结果表明: 优化的PCR反应体系为: 20μL总体系中,含30 ng模板DNA,0.3μmol.L-1随机引物,0.2 mmol.L-1dNTPs,1.4 mmol.L-1Mg2+,0.8 UTaqDNA聚合酶;最佳退火温度为60℃;PCR反应程序为: 94℃预变性5 min;94℃变性1 min,60℃退火45 s,72℃延伸2 min;45个循环;72℃再延伸7 min。