枇杷AS-PCR反应体系的建立和优化

编号 zgly0001444057

文献类型 期刊论文

文献题名 枇杷AS-PCR反应体系的建立和优化

作者 杨芩  付燕  王永清  陶炼  邓群仙  范建新  邓仁菊 

作者单位 凯里学院环境与生命科学学院  四川农业大学园艺学院  黔东南民族职业技术学院 

母体文献 果树学报 

年卷期 2013年01期

年份 2013 

分类号 S667.3 

关键词 枇杷  AS-PCR  正交设计  反应体系 

文摘内容 【目的】建立和优化枇杷AS-PCR反应体系,为开展枇杷S基因快速鉴定奠定基础。【方法】以‘大五星’、‘早钟6号’和‘龙泉5号’为试材,通过正交实验设计对影响枇杷AS-PCR反应较大的Mg2+等5个因素的浓度进行筛选,并对扩增反应程序进行优化,运用正交设计直观分析法和DPS 7.05统计软件对扩增结果进行方差分析。【结果】优化后的枇杷AS-PCR反应分析体系为:25μL反应体系中,含10×buffer2.5μL,Mg2+浓度2.0 mmol·L-1,Taq酶1.5 U,引物0.5μmol·L-1,模板DNA80ng,dNTPs0.4 mmol·L-1。反应程序为94℃预变性1 min;94℃变性30 s,退火温度30 s,72℃延伸1 min,35次循环;72℃延伸5 min,4℃保存。【结论】建立了基于S基因保守序列设计引物的枇杷AS-PCR反应体系,利用该体系成功确定了‘大五星’的S基因型为S2-S41,其中S41为新分离鉴定的枇杷S-RNase基因,它们在GenBank上的登录号分别为JQ228451和JX217035。