利用正交设计优化茶树ISSR反应体系

编号 zgly0000721069

文献类型 期刊论文

文献题名 利用正交设计优化茶树ISSR反应体系

作者 卢莉  张强  王玉花  房婉萍  崔清梅  袁程晓  黎星辉 

作者单位 南京农业大学茶叶科学研究所  恩施州农业科学院茶叶研究所 

母体文献 经济林研究 

年卷期 2010,28(1)

页码 14-19

年份 2010 

分类号 S571.1 

关键词 茶树  ISSR  正交设计  反应体系 

文摘内容 为优化茶树ISSR分子标记反应体系,对影响茶树ISSR反应较大的Mg2+浓度、dNTP浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度5个因素在4水平上进行优化试验,建立了适合于茶树ISSR-PCR(Inter Simple Sequence Repeats-Polymerase Chain Reaction)的最佳体系: 20μL反应体系中,TaqDNA聚合酶0.75U/μL,10×buffer(含Mg2+)2.0mmol·L-1,模板DNA20ng,dNTP0.1mmol·L-1,引物0.3μmol·L-1。反应程序为: 94℃预变性5min,94℃变性1min,50～60℃退火40s,72℃延伸90s,34次循环,72℃延伸7min,4℃保存。