家蚕类ω3-脂肪酸脱氢酶基因的克隆、表达及功能研究

编号 zgly0001554626

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕类ω3-脂肪酸脱氢酶基因的克隆、表达及功能研究

作者 于海彦  周志峰  贾俊强  桂仲争 

作者单位 江苏科技大学生物技术学院  中国农业科学院蚕业研究所 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2017年04期

年份 2017 

分类号 Q78  S881.24 

关键词 家蚕  ω3-脂肪酸脱氢酶  基因克隆  酿酒酵母表达系统  表达谱  多不饱和脂肪酸合成  诱导表达 

文摘内容 ω3-脂肪酸脱氢酶是生物体内催化多不饱和脂肪酸合成的关键酶之一,其表达受生物胁迫和非生物胁迫因素的影响。从家蚕蛹中克隆了类ω3-脂肪酸脱氢酶基因(Bm FAD3-like),该基因具有一个长度为1 083 bp的开放阅读框,编码由360个氨基酸残基组成的分子质量为41.5 k D的蛋白质。将该基因克隆到p YES2.0载体,构建重组表达载体p YBm FAD3-like及重组酿酒酵母工程菌株YBm FAD3-like后进行诱导表达,收集菌体提取脂肪酸,经气相色谱检测表明异源表达的重组Bm FAD3-like能够将诱导表达体系中加入的外源底物亚油酸(LA)转化为α-亚麻酸(ALA)。半定量RT-PCR检测Bm FAD3-like基因mRNA几乎在家蚕5龄第3天幼虫的所有组织中都有转录,在5龄幼虫期、蛹期和蛾期的转录水平较高,并且其转录水平受低温(0℃)和真菌(球孢白僵菌Beauveria bassiana)侵染(6~36 h)诱导显著上调。对家蚕蛹体注射siRNA沉默目的基因12~72 h后,Bm FAD3-like mRNA转录水平显著下调。研究结果表明,Bm FAD3-like的表达产物能催化LA在ω3位脱氢生成ALA,并且该基因在蚕体受到低温诱导和真菌侵染等胁迫时显著上调表达,外源siRNA能够介导该基因的沉默,显著下调其转录水平。