苹果PGIP基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

编号 zgly0001376284

文献类型 期刊论文

文献题名 苹果PGIP基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

作者 熊帅  张军科  谌悦 

作者单位 西北农林科技大学园艺学院农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年02期

年份 2010 

分类号 S661.1 

关键词 苹果  多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白  基因克隆  内源多聚半乳糖醛酸酶 

文摘内容 【目的】从富士苹果幼果果实中克隆多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因,并进行原核表达,为进一步研究PGIP的生物学功能奠定基础。【方法】根据Genbank中已经发表的苹果PGIP基因序列设计引物,采用RT-PCR从苹果果实中扩增PGIP基因cDNA,回收目的基因片段并连接到pMD18-T载体,鉴定后进行测序。然后将PGIP全长cDNA和去信号肽的cDNA导入到pET-32a(+)表达载体中,分别获得融合表达质粒pET-PGIP和pET-PGIP-X,将其分别转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用不同终浓度IPTG进行诱导表达,收集表达产物并进行SDS-PAGE电泳。对pET-PGIP-X基因工程菌表达产物的可溶性进行检测。【结果】苹果PGIP cDNA序列长为1 091 bp,编码区为993 bp,可编码330个氨基酸残基,将其命名为MdPGIP;重组表达质粒pET-PGIP和pET-PGIP-X在宿主大肠杆菌中分别表达出分子质量约49.6和46.1 ku的融合蛋白,pET-PGIP-X表达产物以包涵体的形式存在。【结论】成功克隆了苹果PGIP基因,并在大肠杆菌中获得高效表达。