用毕赤酵母表达李属坏死环斑病毒外壳蛋白基因及表达产物抗血清的制备与研究

编号 zgly0001445772

文献类型 期刊论文

文献题名 用毕赤酵母表达李属坏死环斑病毒外壳蛋白基因及表达产物抗血清的制备与研究

作者 陈定虎  刘恭源  杨雷亮  张博  王勇  张宪臣 

作者单位 中山出入境检验检疫局检验检疫技术中心 

母体文献 植物检疫 

年卷期 2013年01期

年份 2013 

分类号 S41-30 

关键词 李属坏死环斑病毒  外壳蛋白  毕赤酵母  抗血清 

文摘内容 用RT-PCR的方法克隆李属坏死环斑病毒的外壳蛋白(CP)基因,然后将其连接到pGEM-T载体上,得到pGEM-T-PNRSV重组载体,然后将其克隆到真核表达载体pPIC9K上,转化毕赤酵母GS115菌株后,在甲醇的诱导下表达外壳蛋白,表达产物经过SDS-PAGE及Western-blot分析,结果表明该病毒的CP基因在毕赤酵母中得到了高效表达,回收表达蛋白并免疫家兔,获得PNRSV特异性抗血清共计40mL,经过间接酶联免疫吸附法测定其效价为3.2×104,本研究利用基因克隆的方法来制备PNRSV抗血清,完全避免了用该病毒的繁殖来制备抗血清而导致该病毒扩散蔓延的风险。