突托蜡梅ISSR引物反应条件的优化与筛选

编号 zgly0000599094

文献类型 期刊论文

文献题名 突托蜡梅ISSR引物反应条件的优化与筛选

作者 李艳  江玉梅  鲁顺保  彭九生  朱笃 

作者单位 江西师范大学生命科学学院江西省亚热带植物资源保护与利用重点实验室  江西省林业科学院 

母体文献 武汉植物学研究 

年卷期 2008,26(3)

页码 245-250

年份 2008 

分类号 Q75 

关键词 突托蜡梅  DNA提取  ISSR  引物筛选 

文摘内容 为从突托蜡梅(Chimonanthus grammatus)叶片中提取高质量的总DNA，比较了CTAB法、改良的CTAB法、SDS法、高盐低pH值法、SDS-CTAB法、SDS-蛋白酶K法。结果表明：改良的CTAB是提取突托蜡梅基因组DNA的有效方法。以U811(GA)8C为引物，确立了适合突托蜡梅的ISSR反应体系：在20μL反应体系(50ngDNA、0．6μmol/L引物、1．5mmol/L Mg^2＋、0．15mmol/L dNTPs、2.0U Taq DNA聚合酶)中，反应程序为：94℃预变性5min、94℃变性1min、57．2℃退火45s、72℃延伸2min，循环40次，最后于72％延伸5min。用来自不同居群的7个个体，以100个ISSR引物进行PCR扩增，筛选出了扩增效果较好的10个引物，得到了74个位点，其中39个为多态位点，多态性位点比例为52．7％。