人血清对氧磷酶1在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及活性检测

编号 zgly0001468548

文献类型 期刊论文

文献题名 人血清对氧磷酶1在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及活性检测

作者 谭淑敏  李杰  王小飞  舒特俊  陈剑清  张耀洲  于威 

作者单位 浙江理工大学生物化学研究所  浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2014年03期

年份 2014 

分类号 Q55 

关键词 家蚕杆状病毒表达系统  人血清对氧磷酶1  酶活性  糖基化 

文摘内容 对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶,在水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂中发挥重要作用。利用已构建的含人血清pon1基因的原核表达载体pET-28a-pon1,在E.coli中诱导表达人血清PON1,通过Ni-NTA亲和层析纯化后制备兔多克隆抗体;利用Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒vBm-pon1,并感染家蚕5龄幼虫,经SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定人血清PON1在蚕体内成功表达,并获得了纯度较高的重组人血清PON1。以对氧磷为底物,对2个表达系统获得的重组人血清PON1的酶活性进行检测,结果表明在家蚕幼虫体内表达并纯化的重组人血清PON1的酶活性要明显高于在E.coli中表达的人血清PON1蛋白。推测家蚕杆状病毒表达系统比原核表达系统多了糖基化、磷酸化等蛋白质修饰功能。进一步试验验证家蚕幼虫表达的重组人血清PON1去糖基化后其酶活性丧失,表明糖基修饰对于维持PON1的生物学功能至关重要。