家蚕和果蝇的抗菌肽cecropin B基因的原核表达及抑菌活性分析

编号 zgly0001410143

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕和果蝇的抗菌肽cecropin B基因的原核表达及抑菌活性分析

作者 杨莹  王成林  徐家萍  尤征英  凌琳  周敬波 

作者单位 安徽农业大学生命科学学院 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2011年02期

年份 2011 

分类号 S881.2 

关键词 家蚕  果蝇  抗菌肽  Cecropin B  原核表达  抗菌活性  基因结构 

文摘内容 动物抗菌肽天蚕素(cecropin)因具有抗菌谱广、活性较强、不易产生耐药性等特点而成为新型抗菌剂开发的材料。为了探讨通过原核表达的途径高效获取天然cecropin,以重叠PCR方法分别人工合成家蚕(Bombyx mori)和果蝇(Drosophilamelanogaster)的抗菌肽cecropin B基因(CecB2)并克隆至T载体,测序确认后分别克隆至pET-32a载体,转化至E.coli BL21(DE3)宿主菌进行表达。通过SDS-PAGE和Western blotting检测到2种目的蛋白均得到表达,但表达量存在差异,Bradford法测定纯化后的BmCecB2融合蛋白和DmCecB2融合蛋白的质量浓度分别为0.6、2.0 mg/mL。经Ni-NTA亲和层析纯化和透析处理后的2种产物的抗菌活性存在明显差异:DmCecB2和BmCecB2的质量浓度为10 mg/mL时,对E.coli DH5α的抑菌圈直径分别为15、8 mm左右,最小抑菌浓度分别为0.05、0.10 mg/mL。以上结果说明DmCecbB2的原核表达效率及表达产物的抑菌活性均明显高于BmCecB2。用生物信息学方法分析家蚕和果蝇的CecB2蛋白在结构上存在差异,这可能是导致2种产物活性不同的主要原因。