枇杷醇腈酶基因的克隆及结构分析

编号 zgly0000736127

文献类型 期刊论文

文献题名 枇杷醇腈酶基因的克隆及结构分析

学科分类 220.45;经济林学

作者 赵冠杰  白锴凯  郑允权  郭养浩 

作者单位 福州大学药物生物技术与工程研究所 

母体文献 福州大学学报: 自然科学版 

年卷期 2011,39(6)

页码 960-964

年份 2011 

分类号 Q785 

关键词 醇腈酶  枇杷  SEFAPCR  TailPCR  基因克隆 

文摘内容 根据已知的杏仁、黑樱桃醇腈酶基因序列设计了一对同源引物,扩增得到枇杷醇腈酶基因的部分序列.分别设计了三条基因特异性引物和一条基因非特异性引物,采用改进的SEFA PCR方法,进行上下游未知序列的扩增,成功地获得包括启动子区、转录终止子在内的枇杷醇腈酶基因序列,全长5.5 kbp.所得醇腈酶基因含有4个外显子和3个内含子.编码的氨基酸残基序列包括25个氨基酸残基的信号肽和527个氨基酸残基的成熟酶蛋白.采用重叠延伸PCR方法将4个外显子连接获得了连续的醇腈酶编码基因,与pET27b(+)质粒成功构建表达载体,转化Rosetta(DE3).表达的醇腈酶大部分以包涵体形式存在,最终表达的酶活力为1.2 U.mL-1.