小反刍兽疫病毒F蛋白抗原位点的克隆与表达

编号 zgly0001371137

文献类型 期刊论文

文献题名 小反刍兽疫病毒F蛋白抗原位点的克隆与表达

作者 赵永刚  田晓灵  宋厚辉  王志亮  吴树清 

作者单位 中国动物卫生与流行病学中心  内蒙古农业大学动物医学与科学学院 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2009年07期

年份 2009 

分类号 S852.659.5 

关键词 小反刍兽疫病毒  F基因  原核表达  抗原位点 

文摘内容 目的表达小反刍兽疫F蛋白的抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫的抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中PPRV的F基因的抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经ITPG诱导表达PPRVF基因的抗原位点;用SDS-PAGE和Western-Blotting分析抗原位点蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-F35-111(pZLW013)、PET-28b-F143-485(pZLW014)和PET-28b-F323-485(pZLW015)酶切后,均出现与预期相符的片段;DNA测序表明插入的片段的序列与小反刍兽疫F基因的抗原位点序列分别完全一致,其大小分别为251bp、1053bp和514bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和West-ern-Blotting分析,证明小反刍兽疫抗原位点F35-111没有表达、抗原位点F143-485和F323-485得到表达。结论成功表达了PPRVF基因的两段抗原位点蛋白,为日后检测与预防工作奠定了基础。