黑斑蛙精巢组织cDNA文库的构建及泛素基因序列的分析

编号 zgly0000503871

文献类型 期刊论文

文献题名 黑斑蛙精巢组织cDNA文库的构建及泛素基因序列的分析

作者 郑萍萍  陈文  李洁  芮金龙  聂刘旺 

作者单位 安徽师范大学生命科学学院 

母体文献 动物学研究 

年卷期 2007,28(1)

页码 9-16

年份 2007 

分类号 Q959.5 

关键词 黑斑蛙  总RNA  SMART技术  cDNA文库  泛素 

文摘内容 采用SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)技术构建了黑斑蛙(Rana nigromaculata)精巢组织全长cDNA文库。一步法提取成体蛙精巢组织总RNA, 用Powerscript^TM反转录酶逆转录合成第一链cDNA; 再用LD-PCR合成双链cDNA; 经过SfiⅠ酶切和Chroma spin-400柱分离后, 500bp以上的片段与λTriplEx2载体连接, 再用GigapackⅢ Gold Packaging Extract包装蛋白包装, 即获得原始文库。原始文库进行扩增后得到扩增文库。经检测原始文库的滴度分别为2.0×10^6pfu/mL和2.4×10^6pfu/mL, 扩增后的文库滴度分别为0.48×10^9pfu/mL和3.0×10^9pfu/mL, 重组率均在90%以上。通过E.coliBM25.8菌株将文库转化为pTriplEx2质粒, 挑选一阳性克隆进行PCR检测, 其插入片段平均长度约为1.0kb。挑取一阳性克隆分别从5’端和3’端进行测序, 得到一长约1171bp的序列。经序列分析知, 该序列含有完整的编码框, 可编码305个氨基酸, 是一全长cDNA序列。提示所建文库是可以用于全长cDNA的筛选。结果表明, 所构建的黑斑蛙精巢组织cDNA文库的各项指标均满足建库的基本要求。该文库将为蛙类及两栖类的已知或未知的功能基因及新基因的获得及其研究提供可靠资源; 另外, 该文库还将为研究蛙类动物的性别决定和分化相关基因及其表达提供直接的分子资料。