核桃不同时期叶片及不同组织RNA提取方法筛选

编号 zgly0001721785

文献类型 期刊论文

文献题名 核桃不同时期叶片及不同组织RNA提取方法筛选

作者 陈浩  安瑞云  常青山  王梓  毛星夜 

作者单位 河南科技大学林学院  洛阳市隋唐城遗址植物园 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2020年06期

年份 2020 

分类号 S664.1 

关键词 核桃  总RNA  CTAB法  SDS法  Trizol法 

文摘内容 [目的]针对核桃组织中富含多酚、多糖及黄酮类物质含量较高的特点,筛选经济高效、适合核桃不同发育时期叶片及不同组织总RNA的提取方法。[方法]以核桃幼嫩、成龄和衰老叶片为材料,分别采用改良硼砂—CTAB法、改良硼砂—CTAB—异丙醇法、改良SDS法、改良Trizol法Ⅱ以及试剂盒法进行总RNA的提取。以筛选与优化的改良硼砂—CTAB法、改良硼砂—CTAB—异丙醇法分别提取核桃胚、叶柄、韧皮部、雄花的总RNA,并对RNA产量、纯度、电泳图谱和RT-PCR进行分析。[结果]5种方法都可获得核桃总RNA,其中,改良硼砂—CTAB法能够从幼嫩叶片、成龄叶片、叶柄和雄花中获得质量高、完整性好的总RNA,28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,A260/A280介于1.9～2.1之间,A260/A230大于2.0,且总RNA质量浓度可达1 185.2 ng·μL-1;改良硼砂—CTAB—异丙醇法则适合衰老叶片、胚和韧皮部的提取,总RNA质量浓度可达1 019.0 ng·μL-1。通过RT-PCR在不同组织中均能扩增出核桃18S rRNA和翻译起始因子（JreIF1A）片段。[结论]改良硼砂—CTAB法和改良硼砂—CTAB—异丙醇法相比其他3种方法更易排除蛋白质、酚类等杂质干扰,对于不同时期不同组织均有更好的适用性,提取所获得的总RNA纯度和浓度完全符合后续的分子生物学试验要求。