一种大规模筛选单克隆及提取质粒的改进方法

编号 zgly0000355523

文献类型 期刊论文

文献题名 一种大规模筛选单克隆及提取质粒的改进方法

作者 许志茹  李玉花 

作者单位 东北林业大学花卉生物工程研究所 

母体文献 生物技术通讯 

年卷期 2004,15(3)

页码 256-258

年份 2004 

分类号 Q78  Q503 

关键词 cDNA文库  质粒  克隆  特异基因  蛋白质 

文摘内容 利用α-互补(X-gal+IPTG)从cDNA文库中筛选特异克隆, 以此去除含有未插入片段和插入片段小的克隆。运用展库的方法, 通过辅助噬菌体对文库中多个载体的切割, 将载体以质粒的形式转化到大肠杆菌中; 同时对质粒DNA碱裂解提取方法做了改进, 建立了一种简单实用的大量提取质粒DNA的方法。该方法利用特定的蛋白质吸附膜吸附提取过程中的蛋白质, 从而去除了使用酚-氯仿抽提蛋白质的复杂过程, 减少了质粒DNA的损失, 是一次性获得大规模质粒DNA的有效方法。获取的质粒DNA样品在纯度和浓度上都可以满足测序、PCR及Southern杂交等分子生物学实验的要求。