rDNA介导的酿酒酵母稳定表达载体的构建

编号 zgly0001411445

文献类型 期刊论文

文献题名 rDNA介导的酿酒酵母稳定表达载体的构建

作者 张桂敏  曾毓芳  陈雅兰  屠俊  何家亨  马立新 

作者单位 湖北大学生命科学学院 

母体文献 菌物学报 

年卷期 2011年01期

年份 2011 

分类号 Q78 

关键词 酿酒酵母  rDNA介导  糖化酶  生物安全性  剂量效应 

文摘内容 将一段含有质粒ColE1复制起始区(ori)和氨苄青霉素抗性基因(bla)的DNA片段插入到酿酒酵母rDNA片段中部的EcoRI或HpaI位点之间,在pYES2载体的基础上构建了两个rDNA介导的酿酒酵母稳定表达载体pHBM367E或pHBM367H。将黑曲霉糖化酶基因导入载体pHBM367H,获得表达载体pHBM166。为生物安全性的考虑,pHBM166经HpaI酶切去掉2.2kb的ColE1ori和bla片段后转化酿酒酵母Y33菌株,获得不含任何抗生素抗性基因的工程菌。随后,对糖化酶基因在酿酒酵母中的表达、稳定性进行了分析,结果显示,rDNA介导的糖化酶基因在酿酒酵母中的表达呈现不同的剂量效应,挑选高表达的菌株传80代之后仍能保持其产糖化酶的稳定性。