茶树GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶基因cDNA全长的克隆与表达

编号 zgly0000823649

文献类型 期刊论文

文献题名 茶树GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶基因cDNA全长的克隆与表达

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 李佼  余有本  周天山  肖瑶  柳洁  肖斌 

作者单位 西北农林科技大学园艺学院茶叶研究所 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2013(12)

页码 100-106

年份 2013 

分类号 S852.65 

关键词 茶树  GDP-甘露糖-3′  5′-异构酶  荧光定量PCR  原核表达  SUMO表达系统 

文摘内容 【目的】:对茶树GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶(GDP-Mannose-3′,5′-epimerase, GME)基因cDNA全长进行克隆分析及原核表达。【方法】:以茶树品种“乌牛早”叶片的cDNA为模板, 用RT-PCR和RACE技术克隆GME, 并对其进行生物信息学分析。利用pETiteTM N-His SUMO Vector 构建GME原核表达载体pET-GME, 在大肠杆菌HI-Control BL21(DE3)中进行原核诱导表达。采摘同一茶树嫩茎、芽、叶片以及不同品种茶树叶片样品, 提取其RNA, 反转录合成cDNA后, 通过荧光定量PCR分析GME在不同茶树组织和品种中的表达谱。【结果】:克隆获得了长度为1 427 bp的GME cDNA全长序列, 其包含长度为1 131 bp的开放阅读框, 编码376个氨基酸。构建了GME原核表达载体pET-GME, 其在大肠杆菌HI-Control BL21(DE3)中能诱导表达分子质量约60 ku的融合蛋白。荧光定量PCR结果显示, GME基因在芽中的表达量最高, 在嫩茎中的表达量最低, 在叶片中的表达量随成熟度的增加而逐渐降低; 在不同茶树品种之间的表达也存在明显差异。【结论】:从茶树叶片中克隆得到了GMEcDNA全长序列, 并成功对其进行了原核表达。