柠条GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建

编号 zgly0001362119

文献类型 期刊论文

文献题名 柠条GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建

作者 王美珍  王学敏  王赞  高洪文  刘磊 

作者单位 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所  中国农业科学院草原研究所 

母体文献 中国草地学报 

年卷期 2009年05期

年份 2009 

分类号 S541 

关键词 克隆  GDP-甘露糖-3′  5′-异构酶  柠条  序列分析 

文摘内容 L-抗坏血酸是一种抗氧化剂,能够保护植物免受活性氧的伤害,GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶基因(GME)是L-抗坏血酸合成途径中的关键基因。根据其他植物GME的氨基酸保守序列设计简并引物,通过RT-PCR结合RACE扩增技术,从柠条叶片中克隆了1个编码GME的基因,命名为CkGME,Genebank登录号为FJ603689。基因全长1604bp,开放阅读框1134bp,编码377个氨基酸,氨基酸同源性比对分析表明,该基因编码的氨基酸与其他植物GME基因具有较高的同源性。进化树分析表明,该基因编码的氨基酸序列与豆科植物大豆和截型苜蓿的亲缘关系最近,与十字花科植物拟南芥的亲缘关系次之,与禾本科植物水稻和玉米的亲缘关系较远。利用4℃和GA3处理不同时间的柠条植株进行半定量RT-PCR分析结果表明,该基因在4℃处理不同时间后表达量没有明显变化,在GA3处理不同时间后表达量显著下降。利用pCAMBIA-1300质粒构建含35S启动子的正义表达载体,酶切图谱和PCR检测结果证明该表达载体构建成功。