绞股蓝核糖体失活蛋白的分离、克隆与表达

编号 zgly0001272558

文献类型 期刊论文

文献题名 绞股蓝核糖体失活蛋白的分离、克隆与表达

作者 林毅  林奇英  谢联辉 

作者单位 福建农林大学植物病毒研究所  福建农林大学植物病毒研究所 福州  350002博士研究生  福州  350002博士生导师  350002博士生导师 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2003年Z1期

年份 2003 

分类号 Q943.2 

关键词 绞股蓝  核糖体失活蛋白  分离纯化  分子克隆  原核表达  转基因烟草 

文摘内容 核糖体失活蛋白 (ribosome inactivatingprotein ,RIP)具有抗肿瘤和抗病毒等医用价值 ,以及抗植物病毒和病原真菌等农用价值。它是一种多活性的物质 ,不同RIP具有各自独特的功能 ,其潜在活性还在不断发现之中。葫芦科 (Cucurbitaceae)植物大多药食同源 ,其中蕴涵着极其多样的RIP ,但多数已知的RIP其基因尚未被克隆 ,而目前仍无一套快速筛选RIP新基因的方法。葫芦科中的绞股蓝 (Gynostemmapentaphyllum)具有抗癌和抗衰老等特殊功效 ,其中的皂甙和黄酮成分的研究已有大量报道 ,但其活性蛋白成分未见报道。为此 ,本研究开展绞股蓝RIP的分离纯化、基因克隆、原核表达以及转基因植物研究。率先对绞股蓝活性蛋白成分进行研究 ,从中分离到一种新的核糖体失活蛋白 (绞股蓝毒蛋白 ,Gy nostemmin)。它具有很高的抗TMV活性。其分子量约为 2 7kDa。测得其N -端 19个氨基酸序列 :DIN FSLAGADGQTYNTFIA ,与其它植物RIP的同源性为 10 % - 73% ,与葫芦科RIP的同源性为 37% -73%。根据葫芦科RIP上、下游两段高度保守的氨基酸序列设计简并引物对LY1/LY2 ,对基因组DNA进行PCR扩增 ,首次建立了RIP新基因快速筛选体系。从冬瓜和南瓜中分别获得了 1个和 5个RIP新基因 ,长度为 4 0 8bp ,编码 136aa ,与其它葫芦科RIP对应区段的?