巴东木莲DNA的提取及SRAP-PCR反应体系的正交优化止父优化

编号 zgly0000576144

文献类型 期刊论文

文献题名 巴东木莲DNA的提取及SRAP-PCR反应体系的正交优化止父优化

作者 万玉华  余璐璐  李晓玲  陈发菊  梁宏伟  何正权 

作者单位 三峡大学化学与生命科学学院生物技术研究中心／天然产物研究与利用湖北省重点实验室 

母体文献 湖北农业科学 

年卷期 2008,47(9)

页码 980-984

年份 2008 

分类号 Q946.747.1  Q781 

关键词 巴东木莲  DNA提取  SRAP-PCR反应体系  正交设计  优化 

文摘内容 研究确定了提取巴东木莲基因组DNA的方法．采用正交试验设计法对影响SRAP—PCR反应的引物浓度、TaqDNA聚合酶的用量、Mg^2＋和dNTPs浓度及PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了比较、优化，同时对DNA模板浓度进行了筛选。结果表明，Mg^2＋、dNTPs、砌酶及引物的不同水平均对PCR反应结果有显著的影响。建立了巴东木莲20μL SRAP—PCR的反应体系为1xbuffer、Mg^2＋浓度为2．0mmol·L^-1、dNTPs浓度为0．25mmol·L^-1、引物浓度为0．45μmol·L^-2、Toq酶为O．5U和模板DNA40ng。适宜的扩增程序为94℃预变性1min，94℃变性1rain，33℃复性1min，72℃延伸1min，10个循环；94℃变性1min，55℃复性1min，72℃延伸1min，30个循环；最后72℃延伸5min。