正交设计优化山野豌豆SRAP-PCR反应体系与引物筛选

编号 zgly0001625426

文献类型 期刊论文

文献题名 正交设计优化山野豌豆SRAP-PCR反应体系与引物筛选

作者 刘颖  王显国  张巨明  刘芳 

作者单位 华南农业大学农学院  中国农业大学动物科技学院  全国畜牧总站 

母体文献 草业学报 

年卷期 2012年05期

年份 2012 

分类号 S541.9 

关键词 山野豌豆  SRAP  PCR体系优化  正交设计  引物筛选 

文摘内容 采用正交试验设计,以山野豌豆叶片DNA为模板,从Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对山野豌豆SRAP-PCR反应体系进行优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了山野豌豆的SRAP-PCR最佳反应体系。结果表明,山野豌豆SRAP-PCR最佳反应体系为:2μL 10×PCR buffer(不含Mg2+)、30ng的模板DNA、引物2.0μmol/L、Mg2+2.0mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U、dNTP 0.2mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以引物浓度影响最大,dNTP浓度的影响最小。运用该体系对3份山野豌豆种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从98对SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的20对引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为SRAP分子标记技术进行山野豌豆分子遗传学研究奠定了基础。