小鼠Rig-Ⅰ蛋白的原核表达、纯化及其抗体制备

编号 zgly0001354260

文献类型 期刊论文

文献题名 小鼠Rig-Ⅰ蛋白的原核表达、纯化及其抗体制备

作者 陈磊  李咸洋  奚绪光 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院  上海交通大学医学院附属瑞金医院  上海血液学研究所  上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2009年08期

年份 2009 

分类号 Q786 

关键词 小鼠  维甲酸诱导基因Ⅰ(Rig-Ⅰ)  原核表达  抗体制备 

文摘内容 【目的】进一步研究小鼠维甲酸诱导基因Ⅰ(Rig-Ⅰ)蛋白的细胞信号传导、结构与功能。【方法】利用已经构建好的逆转录病毒载体MigRI-Rig-Ⅰ,用PCR方法扩增出小鼠Rig-Ⅰ基因氨基端100 bp长度的片断(Rig-Ⅰ-N),将此片段定向克隆到原核表达载体pGEX-4T2中,构建pGEX-4T2-Rig-Ⅰ-N,再将Rig-Ⅰ基因剩余部分克隆到已构建有Rig-Ⅰ-N部分片段的pGEX-4T2-Rig-Ⅰ-N中,构建融合表达载体pGEX-4T2-Rig-Ⅰ,将其转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,对表达产物GST-Rig-Ⅰ融合蛋白进行纯化,制备抗体,并对抗体效价进行ELISA检测及抗体特异性的Western blot分析。【结果】重组蛋白GST-Rig-Ⅰ能在大肠杆菌中表达,表达的融合蛋白GST-Rig-Ⅰ纯化和洗脱后分子质量为130 ku,纯度>90%,制备的抗体效价达到1∶625 000,并且能够识别在原核表达系统以及真核细胞内表达的小鼠Rig-Ⅰ蛋白。【结论】建立的表达系统能够表达重组蛋白GST-Rig-Ⅰ,制备的抗体具有良好的免疫特异性。