拟南芥Mg2+转运蛋白AtMGT10的原核表达及多克隆抗体制备

编号 zgly0001569402

文献类型 期刊论文

文献题名 拟南芥Mg2+转运蛋白AtMGT10的原核表达及多克隆抗体制备

作者 周亚媚  梁爽  齐亚飞  刘夏燕 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2017年05期

年份 2017 

分类号 Q78 

关键词 Mg2+转运蛋白  AtMGT10蛋白  拟南芥  原核表达  抗体制备 

文摘内容 【目的】在大肠杆菌系统中原核表达拟南芥叶绿体Mg2+转运蛋白AtMGT10,通过免疫健康成年家兔,获得针对AtMGT10蛋白的多克隆抗体,为研究AtMGT10蛋白在植物生长发育中的功能奠定基础。【方法】利用PCR技术克隆AtMGT10基因编码区187786bp的cDNA片段,连接到pET-28a中构建原核表达载体pET-28aAtMGT1063-262,转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株,经IPTG诱导表达带有His标签的His-AtMGT1063-262截短重组蛋白。用镍柱亲和纯化后的重组蛋白作为抗原皮下注射免疫家兔,制备针对AtMGT10蛋白的多抗血清。提取拟南芥野生型叶片总蛋白,用AtMGT10多抗血清进行蛋白免疫印迹检测。【结果】经PCR扩增获得了600bp的AtMGT10基因cDNA片段,成功构建原核表达载体pET-28a-AtMGT1063-262,在大肠杆菌系统中表达出His-AtMGT1063-262蛋白,经亲和纯化后免疫家兔获得了Anti-AtMGT10多抗血清。在拟南芥野生型总蛋白中用Anti-AtMGT10经免疫印迹检测到大约50ku的蛋白条带,利用抗原竞争试验进一步证明检测到的信号就是拟南芥内源AtMGT10蛋白。【结论】原核表达了His-AtMGT1063-262蛋白,成功制备了特异性较强的AtMGT10蛋白多克隆抗体。