斜纹夜蛾Cyp10基因的克隆及表达载体构建

编号 zgly0001544561

文献类型 期刊论文

文献题名 斜纹夜蛾Cyp10基因的克隆及表达载体构建

作者 田航宇  俞丹  邢文溪  李明 

作者单位 云南大学生命科学学院云南省高校动物遗传多样性和进化重点实验室 

母体文献 环境昆虫学报 

年卷期 2017年03期

年份 2017 

分类号 S433.4 

关键词 斜纹夜蛾  Cyp10  克隆  表达  免疫荧光 

文摘内容 亲环蛋白10(Cyclophilin 10,Cyp10)是亲环蛋白家族成员之一,这是一类广泛存在于真核及原核生物内的蛋白家族,其共性是都具有肽基脯氨酰顺反异构酶(Peptidyl-prolyl cis-trans isomerases,PPIase)活性。有研究表明,Cyp10可能参与了肿瘤细胞凋亡蛋白胞质分布的调控,但在昆虫先天免疫中的作用没有见到报道。本研究以斜纹夜蛾Spodoptera litura为研究对象,以寄生后斜纹夜蛾血细胞转录组数据中发现的特异cyp10序列为基础,通过RT-PCR克隆出了cyp10基因,通过生物信息学方法对此序列进行开放阅读框分析(Open Reading Frame,ORF)和序列同源性比对,发现cyp10基因ORF全长486 bp,编码161个氨基酸,具有肽基脯氨酰顺反异构酶家族标签序列:YNGSLFHRNIKGFIVQTG,因此确定为亲环蛋白基因家族成员。构建了包括ORF全长编码区的原核表达载体p ET32a-Cyp10及真核表达载体p IZT/V5-His-Cyp10,经Western blot证明,p ET32a-Cyp10和p IZT/V5-His-Cyp10可分别在大肠杆菌和鳞翅目昆虫细胞系(Hi5,Sf9和Spli221)中表达,蛋白分子量分别是26 k Da和22 k Da。之后以细胞免疫荧光定位法探索Cyp10在家蚕细胞Bm N内的分布,发现Cyp10主要分布于细胞质内。这些结果为进一步探索Cyp10在昆虫先天免疫中的作用奠定了一定基础。