蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的构建

编号 zgly0000807172

文献类型 期刊论文

文献题名 蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的构建

作者 唐波  杜娟  杨力侠  王小海  吴海波  吴勇延  郭泽坤 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(10)

页码 199-206

年份 2012 

分类号 Q591.2 

关键词 Sumo  蛋白质体外修饰  原核表达  Oct4  Sox2 

文摘内容 【目的】:构建一种可获得Sumo修饰蛋白的原核表达系统, 为Sumo化修饰蛋白的批量制备奠定基础。【方法】:用Trizol裂解法提取小鼠畸胎瘤细胞F9的总RNA, 反转录成cDNA后PCR扩增获得Sumo1、Ubc9、Sae2和Sae1基因。将上述基因及相应载体酶切、连接后构建出重组质粒pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF-Sae2-Sae1。采用质粒转化制备阳性克隆感受态细胞质粒转化的方法获得pACYC-Ubc9-Sumo1和pCDF-Sae2-Sae1共表达的Sumo化修饰的原核表达系统。以pGEX-GST-Sox2和pGEX-GST-Sox2^K247R重组质粒为例, 采用Western Blot检测蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的有效性。用另一Sumo修饰底物Oct4及其Sumo修饰位点突变的突变体Oct4K118R转化原核Sumo修饰系统, 并连续传代, 检测蛋白质Sumo化修饰系统的实用性及遗传稳定性。【结果】:构建的蛋白质Sumo化修饰原核表达系统可特异修饰Sumo1的底物Sox2和Oct4; 含有Oct4原核表达载体的蛋白质Sumo化修饰系统可稳定传至15代, 系统的稳定性较好。【结论】:获得了成本较低、特异性强、重复性好、稳定性强的可用于制备Sumo化蛋白的原核表达系统。