单叶省藤三种组织RNA提取和全长cDNA文库构建

编号 zgly0000682775

文献类型 期刊论文

文献题名 单叶省藤三种组织RNA提取和全长cDNA文库构建

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 杨帆  李发根  翁启杰  李梅  洪亚辉  甘四明 

作者单位 中国林业科学研究院热带林业研究所  湖南农业大学生物科学技术学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2010,8(4)

页码 800-803

年份 2010 

分类号 S791.22 

关键词 单叶省藤  RNA提取  cDNA文库 

文摘内容 本实验比较了3种RNA提取方法提取单叶省藤的茎、雄花序和根的结果,改良CTAB法和Trizol法提取的RNA无明显降解、完整性好,均可用于cDNA文库构建,而异硫氰酸胍法提取的RNA降解严重;考虑到改良CTAB法成本较低,故推荐为首选方法。将茎、雄花序和根三种组织的RNA等量混合后,利用SMART策略构建了全长cDNA文库;通过涂平板培养后的菌落计数,测得初库滴度为2.91×10^5cfu/μL;从培养平板上随机挑取16个菌落进行PCR检测,文库重组率为87.5%,插入片段平均长度为1.5kb左右。所建文库的质量可靠,为下一步的EST测序和候选基因发现提供了材料基础。