毛竹不同组织总RNA提取质量的比较

编号 zgly0001732784

文献类型 期刊论文

文献题名 毛竹不同组织总RNA提取质量的比较

作者 方婷  徐倩  金爱武  邓莹  骆争荣  朱强根 

作者单位 浙江农林大学省部共建亚热带森林培育国家重点实验室  丽水学院生态学院 

母体文献 中南林业科技大学学报 

年卷期 2021,(09)

页码 157-165

年份 2021 

分类号 S795.7 

关键词 毛竹  组织  RNA提取  RT-PCR 

文摘内容 【目的】探讨适合于毛竹不同组织尤其是毛竹根系以及种子等总RNA提取的最优方法，获得高质量RNA样品，为今后开展毛竹的分子生物学研究奠定理论基础。【方法】分别采用柱式Trizol法、Trizol法、SDS法、改良CTAB法提取毛竹的细根、气雾根、成熟叶、幼叶、枝、种子、笋等不同组织的RNA，通过NanoDrop2000微量分光光度计检测浓度、1.5%琼脂糖凝胶电泳检测样品完整度以及RT-PCR检测是否存在目标条带，采用Excel和SPSS软件对提取结果进行统计学分析。【结果】4种方法均能从毛竹不同组织中提取到总RNA，其中SDS法提取的RNA浓度较高，但提取时间过长且步骤繁琐，RNA容易发生降解，其质量不适合用于后续的分子生物学试验；柱式Trizol法和Trizol法用时短且提取方法简单便捷，除了对毛竹细根和种子的提取效果不佳外，其余组织的RNA纯度和质量都可以满足后续的试验开展；改良CTAB法适用于各组织，包括木质化程度较高的毛竹细根以及富含淀粉的毛竹种子，缺点是DNA残留明显。除SDS法所获得的浓度较高并与其他3种方法有显著性差异外，其余3种RNA抽提方法对样品总RNA浓度无统计学差异，且各组织RNA反转录为c DNA，以内参基因PhPP2A为目的基因进行RT-PCR扩增，均可在目标位置获得明亮单一条带，约为150 bp。【结论】改良CTAB法最适合毛竹细根以及种子的RNA提取，柱式Trizol法和Trizol法适合毛竹气雾根、叶、枝和笋总RNA的提取。