葡萄果实cDNA文库的构建及鉴定

编号 zgly0001329318

文献类型 期刊论文

文献题名 葡萄果实cDNA文库的构建及鉴定

作者 董清华  冯永庆  秦岭  王有年  沈元月 

作者单位 北京农学院植物科学技术系  北京农学院植物科学技术系 北京  102206  北京 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2007年01期

年份 2007 

分类号 S663.1 

关键词 巨峰葡萄(Vitis vinifera cv.Kyoho)  葡萄果实  RNA提取  cDNA文库 

文摘内容 构建葡萄果实cDNA文库是研究果实发育相关基因表达调控的基础工作。本实验从巨峰葡萄果实中提取了高质量的RNA,利用MMLV反转录酶把总RNA中的mRNA反转录成cDNA第一链,用特异引物进行LD-PCR扩增合成双链cDNA。将分级纯化的带有粘性末端双链cDNA与λTrip Ⅰ Ex2载体连接,重组载体体外包埋成为cDNA原始文库。初步鉴定原始文库的滴度为1.32×106pfu/mL,文库扩增后滴度达1.45×1010pfu/mL。从扩增文库中随机挑取250个克隆进行PCR鉴定,结果表明重组率为98.7%,插入片段大小在0.5~2.0kb之间,因此,本研究成功构建了葡萄果实cDNA文库。