利用TMV-U1 作为载体表达鼠肝炎病毒S糖蛋白片段

编号 zgly0001172138

文献类型 期刊论文

文献题名 利用TMV-U1 作为载体表达鼠肝炎病毒S糖蛋白片段

作者 张光明  潘乃穟  陈章良  BeachyRN 

作者单位 北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室!北京100871  美国Scripps研究所 

母体文献 植物学报 

年卷期 1996年03期

年份 1996 

分类号 Q943.2 

关键词 转基因烟草  外壳蛋白  烟草花叶病毒  抗原表位标记  鼠肝炎病毒 

文摘内容 为了验证转基因烟草中表达的外壳蛋白（ＣＰ）能够重新包被侵入的烟草花叶病毒（ＴＭＶ）的假设，利用抗原表位标记的方法观察ＣＰ亚单位在病毒５′端的交换。通过ＰＣＲ 方法将来源于鼠肝炎病毒（ＭＨＶ） Ｓ蛋白的两个小肽段（１１ ａ．ａ．和１５ ａ．ａ．）的ＤＮＡ序列分别插入ＴＭＶ－Ｕ１ ＣＰ基因邻近３′端的两个位点，并构建了带有外源序列的ＴＭＶ 侵染克隆Ｖ９ （１１ ａ．ａ．）和Ｅ１５ （１５ ａ．ａ．）。通过体外转录反应，得到Ｖ９ ＲＮＡ 及Ｅ１５ ＲＮＡ。突变病毒ＲＮＡ 侵染烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ）后表现不同特性。Ｖ９ 和Ｅ１５ 侵染ＸａｎｔｈｉＮＮ烟草后同野生型ＴＭＶ一样产生枯斑。但是，当它们侵染Ｘａｎｔｈｉｎｎ 烟草时，Ｖ９ 产生同侵染ＸａｎｔｈｉＮＮ 烟草相同的枯斑，而Ｅ１５的特性同ＴＭＶ－Ｕ１几乎完全相同，能对Ｘａｎｔｈｉｎｎ 烟草进行系统侵染并在叶片中聚集大量的带有外源片段的外壳蛋白，而且病毒的结构极其稳定。Ｖ９ 和Ｅ１５ 特性的差异可能是由于外源片段在外壳蛋白中存在位置的不同影响了外壳蛋白的结构所致