5-LO真核表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中的表达的初步研究

编号 zgly0000704083

文献类型 期刊论文

文献题名 5-LO真核表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中的表达的初步研究

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 吴红联  张梅英  王惟  王禄增 

作者单位 中国医科大学实验动物部 

母体文献 实验动物与比较医学 

年卷期 2010(4)

页码 246-250

年份 2010 

分类号 Q95-33 

关键词 5-脂氧化酶  基因克隆  真核表达  RAW264.7细胞 

文摘内容 目的构建5-LO真核表达载体并初步研究其在RAW264.7细胞中的表达, 为建立5-LO高表达转基因小鼠模型提供表达载体。方法从人全血标本中提取细胞总RNA, 以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增5-LO基因, 分别构建5-LO目的基因的克隆载体与表达载体, 提取质粒, 进行酶切、PCR和DNA测序鉴定, 将重组融合表达载体pEGFP-5-LO稳定转染RAW264.7细胞, RT-PCR、western blot方法检测pEGFP-5-LO的表达情况。结果构建了重组克隆载体pUCm-5-LO和真核表达载体pEGFP-5-LO, 经酶切、PCR及测序鉴定正确; 转染细胞后, 在荧光显微镜下观察到pEGFP-5-LO融合蛋白的表达, RT—PCR和Westemblot结果表明转染pEGFP.5-LO的RAW264.7细胞中有5-LO的表达。结论成功克隆了5-LO基因, 构建的表达载体pEGFP-5-LO在RAW264.7细胞中表达5-LO蛋白, 为进一步5-LO高表达转基因鼠模型的建立和临床应用奠定了基础。