铁皮石斛野生居群研究(Ⅳ): RAPD反应体系的构建与优化

编号 zgly0000475458

文献类型 期刊论文

文献题名 铁皮石斛野生居群研究(Ⅳ): RAPD反应体系的构建与优化

作者 丁鸽  丁小余  沈洁  刘冬扬  贺佳  唐凤 

作者单位 南京师范大学生命科学学院 

母体文献 南京师大学报: 自然科学版 

年卷期 2006,29(1)

页码 84-88

年份 2006 

分类号 Q946 

关键词 铁皮石斛  随机增扩多态DNA  反应体系  优化 

文摘内容 为获得铁皮石斛RAPD的最佳反应体系, 本文对影响RAPD反应的模板含量、Mg^2+浓度、dNTP浓度、Taq酶浓度、扩增程序及退火温度等多种因子进行了构建与优化。通过各因子的组合研究, 我们得到铁皮石斛RAPD反应最适扩增体系是: 25μIPCR反应体积, 10×Buffer2.5μL, 2.5mmol/LMgCl2, dNTP2.5μL(各2.5mmol/L), 模板DNA为30ng, Taq聚合酶1.5U, 随机引物12pmol, ddH2O14.2μL.最佳扩增程序: 94℃预变性3min, 94℃变性50s, 38℃复性1min, 72℃延伸2min, 循环40次; 最后72℃延伸5min.4℃保存。