悬铃木AFLP反应体系优化及引物筛选

编号 zgly0000739991

文献类型 期刊论文

文献题名 悬铃木AFLP反应体系优化及引物筛选

作者 刘荣宁  谢一鸣  赵改丽  范国强 

作者单位 河南农业大学泡桐研究所  河南农业职业学院 

母体文献 河南农业大学学报 

年卷期 2011,45(4)

页码 402-406,410

年份 2011 

分类号 S792.37 

关键词 三球悬铃木  AFLP  体系优化  引物筛选 

文摘内容 以三球悬铃木为试验材料,通过对影响AFLP反应体系的各主要因素的研究,建立了悬铃木AFLP分析技术的体系.结果表明,悬铃木AFLP最佳酶切体系(20μL)为模板DNA1 000ng,PstI和MseI各为3 U,在37℃下双酶切3 h;在20μL最佳连接体系中,15μL酶切产物为3U,T4连接酶,0.25μmol·L-1PstI接头,2.5μmol·L-1MseI接头,1μL 10×T4buffer,在22℃下连接12 h;在20μL最佳预扩反应体系中稀释15倍的连接产物5μL,2.0 mmol·L-1Mg2+,2 UTaq酶,200μmol·L-1dNTP,0.5μmol·L-1PstI和M seI引物(P+AGA/M+ATC);在20μL最佳选择性扩增反应体系中5μL稀释15倍的预扩增产物,2.0 mmol·L-1的Mg2+,2 UTaq酶,200μmol·L-1dNTP,0.5μmol·L-1PstI和M seI引物(P+AGA/M+ATC).最后,利用上面的体系筛选出了92对适宜于悬铃木AFLP分析的引物.