湿加松的SSR反应体系优化

编号 zgly0001331303

文献类型 期刊论文

文献题名 湿加松的SSR反应体系优化

作者 陈考科  黄少伟 

作者单位 阳江市林业科学研究所  华南农业大学林学院 

母体文献 广东林业科技 

年卷期 2008年06期

年份 2008 

分类号 S791 

关键词 湿加松  SSR  体系优化 

文摘内容 对湿加松SSR反应体系中模板DNA的用量、Mg2+浓度、dNTPs及Taq酶的用量、变性温度、退火温度、反应循环次数共7个影响SSR扩增效果的因素,逐一设置单因素多水平进行试验,以目测比较确定谱带条数、亮度、清晰度、背景透明度以及结果的重复性等为判定反应条件适合程度的指标,其反应体系为25μL,扩增程序经优化后确定为:10 ng的模板、1×PCR缓冲液、2.5 mM的Mg2+、0.2 mM dNTPs、0.6 UTaq酶、正反向引物各0.2μM;最优反应程序为94℃预变性2 m in之后进入循环,每个循环94℃变性45 s,退火45 s,72℃延伸45 s。退火温度从Tm开始,每隔2个循环降低1℃,直至(Tm-10℃),维持40个循环。循环结束,72℃延伸5 m in。