根癌农杆菌介导的芪合酶基因转化烟草遗传体系的优化

编号 zgly0001392955

文献类型 期刊论文

文献题名 根癌农杆菌介导的芪合酶基因转化烟草遗传体系的优化

作者 安娜  陈耀锋  崔志刚  白延红 

作者单位 西北农林科技大学农学院  杨凌职业技术学院生物工程系 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年05期

年份 2010 

分类号 S572 

关键词 芪合酶基因  烟草  根癌农杆菌  遗传转化 

文摘内容 【目的】研究根癌农杆菌介导的芪合酶基因转化烟草遗传体系的优化条件。【方法】以中烟99叶片为受体,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,GV3101)介导法,将芪合酶基因导入烟草基因组,并对其遗传体系进行了优化,对筛选获得的转基因烟草植株进行检测。【结果】根癌农杆菌介导的芪合酶基因遗传转化的最佳条件为:将预培养2 d的烟草外植体,用稀释10倍的GV3101菌株菌液(OD600=0.6)浸染8 min后,共培养3 d,然后转入含卡那霉素(Km)50 mg/L和羧苄青霉素(Cb)500 mg/L的筛选分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2~3 cm后,转入含Km 50 mg/L和Cb 500 mg/L的筛选生根培养基上进行筛选,在以上最佳遗传转化条件下,初步筛选到54株转化体,经PCR和RT-PCR检测获得25株转化烟草植株。【结论】经卡那霉素筛选、PCR、RT-PCR检测后,初步证明芪合酶基因已被整合到烟草基因组中,并可以正常转录。