农杆菌介导的山苍子遗传转化体系的构建

编号 zgly0001743049

文献类型 期刊论文

文献题名 农杆菌介导的山苍子遗传转化体系的构建

作者 王民炎  俞文仙  赵耘霄  陈益存  高暝  吴立文  吴善群  汪阳东 

作者单位 中国林业科学研究院亚热带林业研究所  南京林业大学  杭州市富阳区农业农村局  福建省大田县森林资源管理站 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2022,35(5)

页码 71-80

年份 2022 

分类号 S718.48 

关键词 山苍子  再生  抗生素  遗传转化  农杆菌介导法 

文摘内容 [目的]筛选适合山苍子愈伤组织分化的激素比例,研究其对抗生素的耐受性,构建山苍子遗传转化体系。[方法]以山苍子无菌苗茎段诱导的愈伤组织为试验材料,研究不同激素浓度配比对山苍子愈伤组织诱导不定芽及不定芽生根的影响,探讨愈伤组织对潮霉素和头孢霉素的临界筛选浓度,并通过农杆菌介导法将外源基因导入山苍子愈伤组织中。[结果]筛选出诱导愈伤组织不定芽分化培养基为:MS+2.0 mg·L^(-1)6-BA+0.01 mg·L^(-1)IBA+0.05 mg·L^(-1)TDZ,分化率为16.67%~36.67%;不定芽生根培养基为1/2MS+0.5 mg·L^(-1)IAA,生根率为97.33%。遗传转化初期筛选抗性愈伤组织的潮霉素浓度为5 mg·L^(-1)(约7~10 d),通过逐步增加潮霉素浓度至30 mg·L^(-1)进行筛选培养,头孢霉素最适浓度为300 mg·L^(-1)。采用农杆菌介导法将外源基因转入愈伤组织中,并设计PCR引物进行鉴定,共检测16株抗性苗均含有目的条带,表明目的基因已插入山苍子基因组中,转化率为0.67%。通过Southern检测表明,目的片段已插入山苍子愈伤组织中。[结论]初步建立山苍子再生及遗传转化体系,且已获得多个基因的抗性愈伤组织,为进一步开展基因功能研究及遗传改良提供技术支持。