美国白蛾核型多角体病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

编号 zgly0001381477

文献类型 期刊论文

文献题名 美国白蛾核型多角体病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者 乔鲁芹  曲良建  王玉珠  张永安  杨忠岐  陶万强  关玲 

作者单位 山东农业大学植物保护学院  中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所  北京市林业保护站 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2010年07期

年份 2010 

分类号 S476.13 

关键词 美国白蛾核型多角体病毒  SYBR GreenⅠ  荧光定量PCR  感病幼虫  检测 

文摘内容 为了建立对昆虫核型多角体病毒(nucleopolyhedrovirus)进行定量检测方法,本研究选用美国白蛾Hyphantria cunea核型多角体病毒的polyhedrin基因为目的基因,经引物设计、PCR扩增、目的片段与载体连接转化以及重组质粒的鉴定,并对重组质粒标准品和样品DNA进行检测,构建出美国白蛾核型多角体病毒SYBR GreenⅠ荧光定量标准曲线。统计学分析显示标准品浓度的对数值与Ct值之间存在良好的线性关系(R=0.998)。该方法的检测灵敏度为101～102拷贝/μL,线性范围达5个数量级,扩增产物形成单一的特异性熔解峰,组内组间的变异系数均小于3%。根据已建立的方法对不同感染时间段的感病幼虫进行检测,每毫克幼虫样本内病毒polyhedrin基因拷贝数增殖倍数对数值与感染时间(d)呈正相关(R=0.987)。这些结果表明,建立的美国白蛾核型多角体病毒荧光定量PCR检测方法是可靠的,具有灵敏度高、重复性好等特点,可为昆虫核型多角体病毒体内增殖动态研究及昆虫病毒的标准化生产提供参考。