中华紫胶虫FAD基因RNA干扰载体构建与功能初步分析

编号 zgly0001685185

文献类型 期刊论文

文献题名 中华紫胶虫FAD基因RNA干扰载体构建与功能初步分析

作者 王伟伟  凌晓霏  陆沁  柳鹏飞  张金稳  陈航 

作者单位 中国林业科学研究院资源昆虫研究所  国家林业与草原局资源昆虫培育与利用重点实验室 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2019年06期

年份 2019 

分类号 S899.2 

关键词 中华紫胶虫  RNA干扰  FAD基因  L4440 

文摘内容 [目的]引入细菌表达dsRNA干扰系统对中华紫胶虫FAD基因进行RNA干扰,通过检测干扰后FAD基因表达量与个体泌胶量动态变化,对FAD基因功能进行初步分析,为验证紫胶合成相关基因功能提供科学基础。[方法]中华紫胶虫FAD基因和L4440载体经双酶切之后,利用T4连接酶连接,构建FAD-L4440重组质粒,并转入HT115感受态细胞中,IPTG诱导表达dsRNA后,通过虫体涂抹法将dsRNA转染到紫胶虫体内。用RT-qPCR检测干扰后FAD基因的表达量并测定干扰后个体泌胶量的变化。[结果]RNA干扰后FAD基因表达量明显降低,其中,以低浓度菌液处理后12 h和中浓度菌液处理后24 h相对于对照组有显著差异,分别降低了90.90%和86.52%,中浓度在72 h时干扰效率高于其他两个组,个体泌胶量与对照组比较有显著下降。[结论]本研究构建了中华紫胶虫FAD基因的RNA干扰载体,在基因功能验证中引入了细菌表达dsRNA的RNAi系统,使用虫体涂抹法将其导入虫体内引起FAD基因表达量与紫胶虫个体泌胶量显著下降,为RNAi转染过程中不适用注射法、喂食等转染方法的昆虫提供技术参考,为后续解析紫胶合成的分子机理提供技术基础与科学依据。