降解赤霉病菌毒素Tri101基因的原核表达及抗体制备

编号 zgly0000658776

文献类型 期刊论文

文献题名 降解赤霉病菌毒素Tri101基因的原核表达及抗体制备

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 闫海霞  杨丽荣  薛保国  段立清  孙虎  全鑫 

作者单位 内蒙古农业大学林学院  河南省农业科学院植物保护研究所 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2010(5)

页码 469-474

年份 2010 

分类号 S432.1 

关键词 Tri101基因  原核表达  多克隆抗体  Western  blot 

文摘内容 采用RT-PCR方法克隆了编码禾谷镰刀菌单端孢酶烯3-O-乙酰转移酶Tri101基因的cDNA序列,并连接到原核表达载体pGEX-4T2上,将获得的重组载体pGEX-4T2/Tri101转化大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,经IPTG诱导后,Tri101基因在大肠杆菌BL21中获得了高效表达,融合蛋白GST-Tri101分子量为75.45 kDa。将该融合蛋白切胶纯化后免疫家兔,制备兔抗GST-Tri101多克隆抗体。经ELISA法测定抗体效价大于1∶256 000。Western blot分析表明制备的抗体与原核细胞体外表达的Tri101蛋白可以特异性结合,表明该抗体的特异性良好。应用该抗体验证了感赤霉病小麦中Tri101基因的表达。兔抗GST-Tri101抗体的成功制备,为进一步研究Tri101的生物学功能、细胞定位以及在其它植物中的表达等奠定了基础。