川山茶ISSR-PCR及SSR-PCR优化体系建立及比较

编号 zgly0001500356

文献类型 期刊论文

文献题名 川山茶ISSR-PCR及SSR-PCR优化体系建立及比较

作者 刘家艳  权俊萍  沈薛洁  卢娟芳  田波  陈启航 

作者单位 重庆市南山植物园管理处  西南大学园艺园林学院 

母体文献 江苏林业科技 

年卷期 2016年05期

年份 2016 

分类号 S685.14 

关键词 川山茶  ISSR-PCR  SSR-PCR  引物  退火温度  TaqDNA聚合酶  正交设计  优化体系 

文摘内容 以川山茶品种茶睡莲为试验材料,以改良CTAB法提取高质量DNA,采用正交设计L16（45）,探讨了Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和模板DNA浓度对川山茶ISSR-PCR和SSR-PCR反应体系的影响。建立了相关优化体系:20μL的ISSR-PCR扩增体系中含20 ng模板DNA,2μL10×Buffer,2 mmol/L Mg2+,0.15 mmol/L dNTPs,0.6μmol/L引物和1 U TaqDNA聚合酶,扩增退火温度为55℃,35个循环;20μL的SSR-PCR扩增体系中含50 ng模板DNA,2.5 mmol/L Mg2+,0.05 mmol/L dNTPs,0.2μmol/L引物和0.5 U TaqDNA聚合酶,最佳退火温度为52℃,最佳循环数为38。应用该优化体系,分别用27个川山茶品种DNA进行了ISSR-PCR扩增和SSR-PCR扩增,结果显示,建立的优化体系具有较高稳定性。