利用正交设计优化水曲柳ISSR-PCR反应体系

编号 zgly0000362533

文献类型 期刊论文

文献题名 利用正交设计优化水曲柳ISSR-PCR反应体系

作者 谢运海  夏德安  姜静  林萍 

作者单位 东北林业大学林学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2005,3(3)

页码 445-450

年份 2005 

分类号 S823  S792.41 

关键词 PCR反应体系  水曲柳  设计优化  ISSR-PCR  ISSR标记技术  MINITAB  Mg^2+  Taq酶  最佳反应体系  模板DNA  标准化程序  正交设计  dNTP  优化试验  统计软件  退火温度  优化系统  地理变异  水平  mol  引物  果用 

文摘内容 利用正交设计L16(4^5)对水曲柳ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶, Mg^2+, 模板DNA, dNTP, 引物)在4个水平上进行优化试验, PCR结果用统计软件MINITAB分析: ①各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响, 其中Taq酶量影响最大; ②筛选出各反应因素的最佳水平, 建立水曲柳ISSR-PCR反应的最佳体系(20μl)为: Taq酶1.0U, Mg^2+ 2.0mmol/L, 模板DNA50-200ng, dNTP0.15mmol/L, 引物0.31μmol/L。最后, 对水曲柳ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火, 得到最佳退火温度为58.3℃。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术, 研究水曲柳的地理变异提供一个标准化程序。