正交设计优化翼梗五味子ISSR-PCR反应体系

编号 zgly0000770157

文献类型 期刊论文

文献题名 正交设计优化翼梗五味子ISSR-PCR反应体系

学科分类 220.1070;森林植物学

作者 吴生  熊宇婷  谢砚  顾蔚 

作者单位 陕西师范大学西北濒危药材资源开发国家工程实验室  药用资源与天然药物化学教育部重点实验室 

母体文献 中草药 

年卷期 2011,42(5)

页码 976-979

年份 2011 

分类号 R282.12 

关键词 翼梗五味子  ISSR-PCR  正交优化  多态性  退火温度 

文摘内容 目的对影响翼梗五味子ISSR-PCR扩增反应的各因素进行优化,建立稳定的反应体系。方法基于正交极差分析方法,以Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP和引物5因素4水平的正交试验对翼梗五味子ISSR-PCR反应体系进行优化。结果翼梗五味子ISSR-PCR的最佳反应体系(20μL)为: Taq酶1.00 U、Mg2+1.50 mmol/L、模板DNA 40.00 ng、dNTP 0.25mmol/L、引物0.50μmol/L。筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并确定了每个引物的最佳退火温度。结论所建立的翼梗五味子ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、重复性好等优点,为翼梗五味子的分子水平研究提供实验依据。