毛果杨中链酰基辅酶A合成酶的克隆及酶学分析

编号 zgly0001527550

文献类型 期刊论文

文献题名 毛果杨中链酰基辅酶A合成酶的克隆及酶学分析

作者 曹山  蒋璐瑶  李丽红  要笑云  张强  撖静宜  王莹  李慧  陆海 

作者单位 北京林业大学生物科学与技术学院 

母体文献 北京林业大学学报 

年卷期 2016年07期

年份 2016 

分类号 S792.11 

关键词 毛果杨  MACS  克隆  原核表达  酶学分析 

文摘内容 中链酰基辅酶A合成酶（MACS）属于腺苷酸合成酶超基因家族,催化中链脂肪酸与辅酶A结合形成相应的中链酰基辅酶A。本研究通过同源检索毛果杨基因组数据库中的4CL基因,克隆得到毛果杨Pt MACS1的基因序列（基因编号:zgly000est Extfgenesh4pg.c640066）。通过序列分析可知,Box I和Box II两个在4CL中保守的结构域在该蛋白中并不保守。将Pt MACS1与原核表达载体p ET-30a（+）构建融合表达载体Pt MACS1-p ET-30a（+）,转化大肠杆菌BL21（DE3）后诱导重组蛋白进行表达。镍柱纯化重组蛋白后进行酶学活性分析,研究结果表明该蛋白对中链脂肪酸己酸、壬酸、癸酸显示出明显活性:Kcat分别为（130±2.65）、（193±3.46）、（201±5.51）μmol/（min·mg）,以该蛋白的最适底物癸酸测得该蛋白的最适反应温度为37℃,最适反应p H为7.0。该结果表明,Pt MACS1属于毛果杨中链酰基辅酶A合成酶家族一员,为后续毛果杨腺苷酸合成酶超基因家族的鉴定及分类分析提供资料。