人参鲨烯环氧酶基因的克隆与原核表达

编号 zgly0000807173

文献类型 期刊论文

文献题名 人参鲨烯环氧酶基因的克隆与原核表达

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 胡薇  刘宁  田玉华  李雨婷  张连学 

作者单位 吉林农业大学生命科学学院  吉林农业大学中药材学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(10)

页码 207-212

年份 2012 

分类号 Q786 S567 

关键词 人参  鲨烯环氧酶  cDNA克隆  原核表达 

文摘内容 【目的】:克隆人参皂苷生物合成途径中的鲨烯环氧酶(SQE)基因, 并进行原核表达与纯化, 初步探讨SQE活性与人参皂苷生成量之间的关系。【方法】:以4年生人参根组织须根为材料, 提取其总RNA, 反转录为cDNA。以合成的cDNA为模板, 对SQE基因进行克隆, 再将其插入原核表达载体pET-30a中, 构建pET-30a-SQE重组质粒, 经酶切和测序鉴定后, 转入Rosetta大肠杆菌, 经0.8 mmol/L IPTG 37 ℃诱导表达4 h后, 进行SDS-PAGE电泳检测, 采用NiAgarose亲和层析柱纯化目的蛋白, 利用液相色谱串联质谱联用技术(LC-MS)检测SQE的活性。【结果】:获得了人参SQE基因1 611 bp的全长编码区cDNA。酶切和测序结果表明, 原核表达载体pET-30a-SQE构建成功; SDS-PAGE分析显示, 在Rosetta大肠杆菌中成功诱导表达了SQE融合蛋白, 且纯化后的目的蛋白纯度较高; LC-MS联用检测结果发现, 随着SQE用量的增加, 达玛烯二醇的生成量递增。【结论】:克隆了人参SQE基因, 获得了在体外具有生物学活性的SQE蛋白, 并证实了其活性与人参皂苷生成量有很大的相关性。