红鳍东方鲀Sirt1基因的克隆及其原核表达

编号 zgly0000807290

文献类型 期刊论文

文献题名 红鳍东方鲀Sirt1基因的克隆及其原核表达

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 张伟  杨志军  王群  渡部终五 

作者单位 华东师范大学生命科学学院  东京大学  新乡医学院基础医学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(8)

页码 54-59

年份 2012 

分类号 S917 Q786 

关键词 红鳍东方鲀  Sirt1  基因表达  cDNA克隆  原核表达 

文摘内容 【目的】:克隆红鳍东方鲀Sirtuin1(Sirt1)基因编码阅读框(ORF),并对其进行原核表达。【方法】:采集红鳍东方鲀脂肪组织,提取其总RNA,采用RT-PCR方法扩增和克隆红鳍东方鲀Sirt1基因的ORF,构建其原核表达载体pET32a/Sirt1,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。【结果】:红鳍东方鲀Sirt1基因ORF区由2 070个核苷酸组成,编码689个氨基酸。根据红鳍东方鲀Sirt1ORF核苷酸序列推测的氨基酸序列与其他物种进行比对,发现其与罗非鱼(Oreochromis niloticus)、非洲齿鲤(Nothobranchius furzeri)、科恩氏假鳃鳉(Nothobranchius kuhntae)、斑马鱼(Danio rerio)、人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)的同源性分别为82%,82%,81%,66%,72%和69%;成功构建了重组质粒pET32a/Sirt1,用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,在约105ku处有特异性的蛋白条带出现。【结论】:克隆得到红鳍东方鲀Sirt1基因的ORF序列,并成功对其进行了原核表达。